做實(shí)驗的時(shí)候才發(fā)現細胞的種類(lèi)太多,于是我們需要查詢(xún)各種文獻看每個(gè)細胞的特征,從而設計實(shí)驗規劃與步鄹,我們在緊湊的實(shí)驗種完美了實(shí)驗,提交文章的時(shí)候,才發(fā)現,需要細胞鑒定。

據統計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果……這浪費大量時(shí)間、精力和金錢(qián)。因此NIH、ATCC等權威機構多次發(fā)出呼吁,要求研究者對細胞進(jìn)行鑒定,最近美媒報道1/6科學(xué)家在研究使用“假冒”細胞,2014年12月、2015年2月Science雜志分別發(fā)表文章專(zhuān)題闡述細胞交叉污染和錯誤辨識的嚴重性;2015年4月Nature通知:Nature旗下所有雜志將要求作者鑒定論文中所用細胞系;2015年6月即有報道稱(chēng)一科學(xué)家因用錯細胞系,撤銷(xiāo)Nature論文。NIH、ATCC、Nature和Science等機構對此多次發(fā)出呼吁,要求研究者對細胞進(jìn)行鑒定,STR基因分型已被作為金標準應用于細胞系鑒定,越來(lái)越多雜志開(kāi)始要求投稿人提供細胞STR鑒定結果。

在2011年美國就已經(jīng)頒布了細胞STR鑒定國家標準(ANSI/ATCC ASN-0002-2011)。目前STR檢測已被廣泛應用于親子鑒定、個(gè)體識別、細胞來(lái)源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等國際知名細胞庫已將STR基因分型列為細胞鑒定的金標準。

STR鑒定已經(jīng)成為了細胞株的“身份證”能在科研界通行無(wú)阻,必須要有STR。那么動(dòng)物源呢,因為建立的DNA條帶并不完善,目前只有小鼠的部分細胞可以提供STR。

STR鑒定描述:

利用熒光標記擴增產(chǎn)物長(cháng)度多態(tài)分析方法對細胞樣本進(jìn)行9個(gè)/16個(gè)STR位點(diǎn)進(jìn)行分型。設計PCR引物,組成2個(gè)PANEL用于擴增多態(tài)位點(diǎn)。位點(diǎn)的熒光標記采用引物上標記5’FAM熒光標記。引物用在線(xiàn)Primer3 軟件設計(http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)。PCR產(chǎn)物稀釋后取少量與內標標記混勻后直接上ABI 3130xl進(jìn)行毛細管電泳,數據文件用GeneMapper4.0(Appliedbiosystems)來(lái)分析。

STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復序列)是一類(lèi)廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復序列,由于其核心序列重復次數存在個(gè)體差異多態(tài)性,因此STR也被稱(chēng)為細胞的DNA指紋。

我們的收樣和鑒定:

1. T25瓶活細胞和凍存管或將1×10的五次方以上細胞懸液置于1.5毫升EP管,用封口膜密封,做好標記并附送清單。

2. 鑒定時(shí)間:2周內出結果,提供鑒定報告。